◎邁新技術(shù)交流塑料包埋不脫鈣大塊骨組織切片及染色呂榮徐新智王軍2500型切片機,制作塑料包埋不脫鈣大塊骨組織切片,獲得8~ 10Pm厚完整切片。游離片染色,著(zhù)色效果良好。
1材料與方法1.1取材部位狗撓骨,大小35mmX 20%中性福爾馬林液內固定1~2d流水沖洗1~2h1.2包埋劑的制備1號試劑:甲基丙稀酸甲脂400ml鄰苯二甲酸二丁酯100ml二甲苯500ml2號試劑:甲基丙稀酸甲酯800ml,鄰苯二甲酸二丁酯200ml 3號試劑:甲基丙稀酸甲酯800ml過(guò)氧化苯甲酰20g鄰苯二甲二丁酯200mL4號試劑:甲基丙稀酸甲酯800ml過(guò)氧化苯甲酰60g鄰苯二甲酸二丁酯200ml.(過(guò)氧化苯甲酰需在37°C烘箱內干燥24h后方可使用,3號、4號試劑配制完畢后儲存于4C冰箱中)1.3脫水與包埋1.3.1骨組織浸入70%,80%,90%,正丁醇,無(wú)水乙醇1 11,二甲苯111,各2h 1.3.2浸入1號,2號,3號包埋劑內各2~ 1.3.3將干燥后的樣品置于小玻璃瓶中(小玻璃瓶容量大小一般為樣本的3~5倍)1.3.4用鉛筆書(shū)寫(xiě)標簽紙,并用透明膠帶粘于玻璃瓶體上。
1.3.5將玻璃瓶放入抽真空泵內(一0.64個(gè)大氣壓)抽1~ 1.3.6小玻璃瓶加蓋,并穿入7號針頭2個(gè)(排氣),在放入抽真空泵繼續抽1h放入37C烘箱內1d完全凝固后,將玻璃瓶置于一30 C冰箱15min取出用布包瓶,敲碎玻璃瓶,取出包埋塊,并即時(shí)標記。
1.4切片的制作對包埋塊適當修整,使其能固定于切片機上。切片厚度10Pm1.5游離片染色1.5.1切片的準備切片浸入0. 1%甲酸10min自來(lái)水10次/min:20010328修改日期:2001 0725作者單位:第四軍醫大學(xué)西京醫院全軍骨科研究所,西安710032 1.5.2染液的制備A液:固綠FCF 3.75g蒸餾水500mW水醋酸6mlB液:天青1 1.5g蒸餾水250ml.C液:堿性品紅5g將A、B、C液混合,攪拌,溶解后過(guò)濾,60C干燥,制成骨染色粉。使用前用70%乙醇100ml加骨染色粉0. 1.5.3骨粉染色液內10min蒸餾水洗3次,無(wú)水乙醇3次/2min中性樹(shù)膠封固2結果3體會(huì )3.1影響因素(1)溫度:高溫可引起爆聚,包埋塊變脆。(2)必須充分抽真空,如抽真空不徹底,組織塊內殘留大量氣泡,影響切片質(zhì)量,甚至造成切片完全失敗。(3)漂片水溫過(guò)高塑料易溶解,水溫過(guò)低塑料及組織不宜展平。(4)染色時(shí)間的長(cháng)短決定染色的深淺。(5)過(guò)氧化苯酰的量應根據溫度高低而定,一般為20 3.2缺點(diǎn)(1)周期長(cháng),從固定、脫水、浸塑、切片約需2周。(2)包埋液在聚合時(shí)易產(chǎn)生氣泡。(3)切片不易攤平。(4)由于脫片不宜做組化和雜交方面的染色,只實(shí)用于做游離染色。